蛋白質(zhì)免疫印跡法，即Western Blot，是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的信息，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。

     實驗過程中，是選擇一個濃度的膠來進行樣本的分離，還是選擇梯度膠，普通膠和梯度膠兩者之間有怎樣的差別？

普通膠和梯度膠兩者的差別：

1 、首先，梯度凝膠比普通膠的分離范圍更寬，可以同時分離較大范圍分子量的蛋白質(zhì)。普通膠電泳對于分子量超過其分離范圍的蛋白質(zhì)，過大或過小，都不能分離。

2、而梯度凝膠孔徑范圍比普通膠大，分子量較大的蛋白質(zhì)可以在凝膠頂部大孔徑部分得到分離，而分子量較小的蛋白質(zhì)可以在凝膠底部小孔徑部分得到分離，所以分子量較大和較小的蛋白質(zhì)可以同時得到分離。

3、梯度凝膠可以分辨分子量相差較小，在普通膠中不能分辨的蛋白質(zhì)。電泳過程中，蛋白質(zhì)在梯度凝膠中遷移，經(jīng)過的孔徑越來越小，直到凝膠的孔徑不能通透。

4、電泳過程中蛋白質(zhì)被濃縮，集中在一個很窄的區(qū)帶中，而分子量略小的蛋白質(zhì)，可以遷移得更靠前一些，被集中在略前面的區(qū)帶中。由于梯度凝膠孔徑逐步變小，在蛋白質(zhì)不能通透的孔徑附近，對蛋白有濃縮作用。

5、電泳后形成很窄的區(qū)帶，可以分辨出分子量相差較小的蛋白質(zhì)。對于太稀的樣品，在電泳過程中可以將樣品分幾次加樣，大小不同的蛋白質(zhì)分子最終都會滯留在其相應(yīng)的凝膠孔徑中而得到分離。

6、可以直接測定天然狀態(tài)蛋白質(zhì)的分子量而不需要解離為亞基，因此這一方法可以與SDS-PAGE測定分子量的方法互為補充。

不同濃度普通膠和梯度膠的效果展示：

• 10%濃度的膠在20-100kDa的范圍分離比較均勻
• 15%濃度的膠在分離特別小分子的蛋白時，分的比較開，但是大分子就很難分離開
• 梯度膠在5-400kDa范圍，蛋白分布都比較均勻，且都分離比較明顯，所以如果有大小蛋白同時想分離在一塊膠時，梯度膠的效果就非常明顯了。